400號美國國道(U.S. Route 400,縮寫US 400),是一條主要為東—西向的美國國道,全長481.306英里(774.587公里),於1994年完工啟用。該道路的西部端點位於科羅拉多州格拉納達的385號美國國道路口,東部端點位於密蘇里州喬普林(英语:Joplin, Missouri)西南方,靠近洛馬琳達(英语:Loma Linda, Missouri)的44號州際公路交流道,最終路段與166號美國國道(英语:U.S. Route 166)共線。400號美國國道西側原本止於堪薩斯州花園城(英语:Garden City, Kansas),1996年才延伸至目前的端點。